Антигены эритроцитов, определение полных и неполных антител, кровь. Изоантигены эритроцитов системы резус

💖 Нравится? Поделись с друзьями ссылкой

Аллоиммунные антитела – антитела к антигенам эритроцитов. Основные показания к применению: профилактика резус-конфликта при беременности, невынашивание беременности, гемолитическая болезнь новорожденных, переливание крови с целью профилактики посттрансфузионных осложнений.

В эритроцитах человека содержится большое количество групповые антигенов, образующих групповые системы, состоящие из одной или нескольких пар антигенов. Известны такие групповые системы крови, как - АВ0, резус-фактор, Келл, Левис (Lewis), Кидд, MNSs, Даффи, Диего и другие.
Аллоиммунные антиэритроцитарные антитела - антитела к резус-фактору и другим эритроцитарным антигенам, появляющиеся в крови после переливания несовместимой донорской крови или при беременности. Появление в сыворотке крови аллоиммунных антител свидетельствует о сенсибилизации организма и увеличения риска осложнений при переливании несовместимой крови, наличии риска невынашивания беременности и развитии гемолитической болезни плода у резус-отрицательной женщины при резус–положительной крови у плода.
Резус - антитела относятся к так называемым аллоиммунным антителам, поскольку появляются в крови резус - отрицательных людей лишь при особых условиях. Условиями, способствующими образованию резус - антител, являются введение резус - отрицательному человеку резус - положительной крови или беременность резус - отрицательной женщины резус - положительным плодом. Аллоантитела содержатся в сыворотке индивида и не взаимодействуют с антигенами собственных эритроцитов. Они взаимодействуют с антигенами эритроцитов других пациентов после переливания крови или при беременности.
Определение резус - антител наряду с определением резус - принадлежности больного и донора необходимо для предупреждения переливания резус - несовместимой крови, а также для диагностики возможного заболевания плода или новорожденного гемолитической болезнью. Определение резус - антител требуется также при подготовке материла в целях использования для приготовления сывороток антирезус. Резус - антитела бывают разные по специфичности: анти-D, анти-С, анти-Е, анти-с, анти-е; и по форме: полные и неполные. Специфичность антител определяется тем, с каким из антигенов они реагируют. Форма антител определяется тем, каким образом они реагируют с эритроцитами, содержащими специфические для них резус - антигены. Полные антитела, соединяясь с резус - антигенами эритроцитов, вызывают агглютинацию этих эритроцитов при реакции в солевой среде. Неполные антитела в этих условиях лишь соединяются с эритроцитами, но не вызывают агглютинации, так что внешне эта реакция ничем не проявляется. Для того, чтобы установить, произошла ли реакция между неполными резус - антителами и эритроцитами, необходимы специальные условия, в частности, добавление различных коллоидов (желатин, полиглюкин) или проведение пробы Кумбса. При всех перечисленных условиях реакция между резус - антителами и эритроцитами, содержащими резус - антиген, в конечном итоге также проявляется в виде агглютинации эритроцитов.
Антигены системы резус имеют белковое происхождение. Одной из характерных черт данной системы является выраженный полиморфизм, что обусловливает наличие многих разновидностей антигенов. В эритроцитах человека выявляется большое количество антигенов и их систем - D, Du, C, c, E, e, Cw, M, N, S, Kell, Kidd, Duffy, Diego и другие. Наибольшее клиническое значение в настоящее время имеют антигены из группы резусов Rh (5 основных) – D, C, c, E, e, а также антигены системы Kell (антигены – К, к, Кu и др.). Антиген D и представляет собой, так называемый, резус-фактор (Rh) . 86% населения Российской Федерации относят к резус-положительным (Rh+). Остальные 14 % населения являются резус-отрицательными (Rh-). Резус-отрицательными считают доноров, кровь которых не содержит ни одного из антигенов – D, C и E. Антиген D имеет разновидности, так называемые, «слабые» варианты, которые составляют группу – Du и встречающиеся с частотой 1%. Доноры, содержащие Du, должны быть отнесены к резус-положительным. Это необходимо учитывать при переливании крови для избежания гемотрансфузионных осложнений.

Обнаружить такие антигены можно, применяя специальные методы.
В основе теста лежит иммунологическая особенность эритроцитов группы 0 - они не несут на себе ни А-, ни В-антигенов. Поэтому любая агглютинация при добавлении к ним сыворотки пациента будет обусловлена присутствием в ней нетипичных антител. Отсутствие агглютинации указывает на их отсутствие.
В ряде случаев к данным антигенам в организме человека начинается выработка антител (аллоиммунных антител). Такое состояние чаще наблюдается при беременности и переливании крови. Во время беременности у резус-отрицательной матери резус-положительного плода может развиться резус-конфликт, заключающийся в образовании антител в организме матери к эритроцитам плода, что способствует разрушению эритроцитов плода. Такой конфликт может приводить к выкидышу или гемолитической анемии плода. Если плод резус-отрицательный у резус-положительной матери, то резус-конфликт не развивается. Наибольший риск возможен при беременности если мать принадлежит к первой группе крови и резус-отрицательна, а отец - первой группы и резус-положительный. В этом случае имеется один шанс из четырех, что ребенок будет резус-положительным.
Любой из выше перечисленных антигенов при попадании в кровь антиген-отрицательной матери (не содержащей различные виды эритроцитарных антигенов) может вызвать появление аутоантител и осложнять течение беременности. Иммуногенность основных антигенов системы-резус убывает в порядке: с- Е-С-е.

Для профилактики резус-конфликта при беременности резус-отрицательные женщины должны находиться на учете в женских консультациях и проходить периодические обследования на появление аллоиммунных антител (чаще определяют антитела к резус-фактору), поскольку риск развития резус конфликта в этой ситуации может составлять до 15%.

Антигены эритроцитов (ABO, Rh, Kell), принципы определения, клиническая значимость. Лабораторные методы контроля в трансфузиологии

Группы крови определяются различным сочетанием антигенов эритроцитов (агглютиногенов) и антигенов плазмы (агглютининов). Но понятие «группа крови» подразумевает все генетически наследуемые факторы, выявляемые в крови человека: сывороточные и клеточные факторы (эритроцитарные, лейкоцитарные, тромбоцитарные). Известно около 250 групповых антигенов, которые объединяются в системы. Для эритроцитов известно более 15 систем. Наиболее распространенная система – система АВО. Другие антигенные системы эритроцитов: *система Lewis, *система Kell, *система Duffy, групповая система MNS, система крови Резус, система Кидд.

Система групп крови АВО

Открыта в 1901г. Карлом Ландштейнером.

Аллели группы крови наследуются кодоминантно. Полиморфизм групп крови в системе определяется распространенностью и числом аллелей генов в популяции. Наиболее часто встречаются I и II группы.

Выделяют 4 группы крови в зависимости от сочетания агглютиногенов эритроцитов (А, В) и агглютининов плазмы (α, β). Уникальность системы АВО состоит в том, что в плазме у неиммунных людей имеются естественные антитела к отсутствующему на эритроцитах антигену: у лиц группы О (1) - антитела к А и В; у лиц группы А (П) - анти-В-антитела: у лиц группы В (ПI) – анти-А-антитела; у лиц группы АВ (IV) нет антител к антигенам системы АВО. Особенность анти-А-антител и анти-В-антител - способность к резкой активации комп­лемента, что обусловливает их клиническую значимость. При переливании АВО-несовместимой крови специфические антитела активируют комплемент, что ведет к внутрисосудистому лизису эритроцитов, развитию диссеминиро­ванного внутрисосудистого свертывания (ДВС) крови и острой почечной не­достаточности у реципиента.

Определение группы крови необходимо для совместимого переливания крови. Эритроциты донора не должны содеожать антигена, соответствующего антителам реципиента, т.е. А и α , В и β , так как иначе произойдёт массивный гемолиз введённых эритроцитов антителами реципиента.

Существуют разновидности (слабые варианты) антигена А (в большей степени) и реже антигена В. Что касается антигена А, имеются варианты: "сильный" А1 (более 80%), слабый А2 (менее 20%), и еще более слабые (А3, А4, Ах - редко). Это теоретическое понятие имеет значение для переливания крови и может вызвать несчастные случаи при отнесении донора А2 (II) к группе 0 (I) или донора А2В (IV) - к группе В (III), поскольку слабая форма антигена А иногда обуславливает ошибки при определении группы крови системы АВO. Правильное определение слабых вариантов антигена А может требовать повторных исследований со специфическими реагентами. Снижение или полное отсутствие естественных агглютининов альфа и бета иногда отмечается при иммунодефицитных состояниях: 1) новообразования и болезни крови - болезнь Ходжкина, множественная миелома, хроническая лимфатическая лейкемия; 2) врожденные гипо- и агаммаглобулинемия; 3) у детей раннего возраста и у пожилых; 4) иммуносупрессивная терапия; 5) тяжелые инфекции. Трудности при определении группы крови вследствие подавления реакции гемагглютинации возникают также после введения плазмозаменителей, переливания крови, трансплатации, септицемии и пр.

Определение групп крови по с-ме АВО:

1. При помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Устанавливают наличие или отсутствие агглютиногенов, делают заключение о групповой принадлежности крови.

2. Определение группы крови перекрёстным способом, т.е одновременно при помощи стандартных гемагглютинирующих сывороток и стандартных эритроцитов. Определяют наличие или отсутствие агглютиногенов и групповых агглютининов.

3. Определение группы крови с помощью моноклональных антител (ЦОЛОКЛОНов).

Система групп крови Lewis

Антигены этой системы не синтезируются эритроидными клетками-предшественниками, а адсорбируются эритроцитами из плазмы. Антигены экспрессируются во многих тканях организма, в частности, на эпителии дыхательных, мочевыводящих путей, ЖКТ.

Антигены системы кодируются генами на 19 хромасоме.

Существует 3 главных фенотипа системы Lewis: 1. Le a + b - 2. Le a - b + 3. Le a - b -

Антигены системы Le участвуют в воспалительном ответе. Они связывают нейтрофилы и моноциты с эндотелием сосудов и помогают им мигрировать через эндотелий во внесосудистые очаги воспаления. Лица с Le a - b - имеют дефект противоинфекционной резистентности.

Система групп крови Duffy

Гликопротеин Duffy – рецептор ростовых факторов, связывает цитокины, по структуре принадлежит к суперсемейству рецепторов, ассоциированных с G-белками. Функция до конца не изучена.

Групповая система Келл (Kell) состоит из 2 антигенов, образующих 3 группы крови (К-К, К-k, k-k). Антигены системы Келл по активности стоят на втором месте после системы резус. Они могут вызвать сенсибилизацию при беременности, переливании крови; служат причиной гемолитической болезни новорожденных и гемотрансфузионных осложнений. Наиболее иммуногенен KEL7.

Групповая система Кидд (Kidd) включает 2 антигена, образующих 3 группы крови: lk (a+b-), lk (A+b+) и lk (a-b+). Антигены системы Кидд также обладают изоиммунными свойствами и могут привести к гемолитической болезни новорожденных и гемотрансфузионным осложнениям.

Групповая система MNS является сложной системой; она состоит из 9 групп крови. Антигены этой системы активны, могут вызвать образование изоиммунных антител, т. е. привести к несовместимости при переливании крови; известны случаи гемолитической болезни новорожденных, вызванные антителами, образованными к антигенам этой системы.

Система крови Резус

Открыта в результате иммунизации кроликов кровью макак Резус.

Полиморфная система, подразделяется на 5 основных групп: D, C, c, E, e. Основная подгруппа – D, встречается у 80% европейцев и у 100% лиц монголоидной расы.

Антиген Rh экспрессируется на мембране эритроцита в присутствие вспомогательного гликопротеина Rh50. Аминокислотная последовательность этого белка имеет 40%-гомологию с белком Rh. Все белки Rh образуют структуру, 12 раз пронизывающую мембрану.

Обнаружена связь между Rh матери и гемолитической болезнью новорожденных (у Rh - -матери образуются антитела к эритроцитам Rh + -плода).

Rh + -людей – 85%, Rh - -людей –15%.

Определение с помощью двух серий стандартных сывороток антирезус.

Антигенная система лейкоцитов и тромбоцитов

Лейкоциты имеют более 90 антигенов. Основные антигены лейкоцитов – антигены МНС первого типа (подгруппы А, В, С) и второго типа (подгруппы DR, DQ, DP).

Основные антигены тромбоцитов – 5 антигенов типа HPA (1, 2, 3, 4, 5). При участии антител к HPA развивается тромбоцитопеническая пурпура новорожденных, посттрансфузионная пурпура и развивается рефрактерность к траксфузиям тромбоцитов.

Метод агглютинации в геле для определения антигенов эритроцитов и антиэритроцитарных антител

Введение

Гелевая технология в микропробирках (ГТМ) была предложена Y. Lapierre в 1989 г. Метод основан на агглютинации эритроцитов в агаровом геле "сефадекс", помещенном в микропробирки. Обычно система представляет собой пластиковые карты, содержащие микропробирки, заполненные гелем (патент DiaMed AG, Швейцария). Иммуногематологические исследования, основанные на реакции гемагглютинации, обычно проводятся в жидкофазных системах.

Одним из наиболее важных условий получения корректных данных реакции агглютинации является оценка результата. Слабая реакция может быть неверно интерпретирована, особенно неопытным персоналом. Ложные слабые или отрицательные результаты непрямого антиглобулинового теста могут иметь место за счет нейтрализации антиглобулинового реагента следами сыворотки вследствие недостаточно эффективного отмывания эритроцитов. Неадекватное перемешивание эритроцитов и элюция слабофиксированных антител в процессе отмывания могут стать причиной ошибок при проведении непрямого антиглобулинового теста.

Методика агглютинации в геле была разработана с целью стандартизации реакций гемагглютинации и получения достоверных результатов. Гелевая технология предусматривает разделение эритроцитов при центрифугировании, при этом неагглютинированные эритроциты проходят через гель и оседают на дне пробирок (отрицательный результат), в то время как агглютинированные задерживаются на поверхности или в толще геля (положительный результат). Центрифугирование в геле может быть конечной фазой любых серологических исследований, основанных на реакции гемагглютинации, кроме методов, требующих диспергирования для оценки результата.

Диапазон выполняемых тестов включает в себя определение фенотипа эритроцитов (включая слабые варианты антигенов), антиглобулиновый тест, скрининг и идентификацию антител, тесты на совместимость и некоторые другие.

Принцип гелевого теста

Забуференный декстрановый гель Sephadex ТМ G 100 superline может быть как нейтральным, так и содержащим специфические антисыворотки или антиглобулиновый реагент на гелевом матриксе. На гель наносятся эритроциты или смесь эритроцитов и сыворотки. Клетки всегда вносятся перед сыворотками - в отличие от стандартных серологических методик - с тем, чтобы тестируемые сыворотки не контактировали с гелем, что особенно важно при проведении антиглобулинового теста. После инкубации следует центрифугирование в строго определенном режиме. Если условия центрифугирования не выполняются (центрифугирование недостаточно длительное или слишком мягкое) могут иметь место ложноположительные результаты. Ложноотрицательные результаты также могут иметь место при нарушении условий (форсировании) центрифугирования. Использование автоматической ID-центрифуги (ДиаМед) устраняет эти проблемы. Для проведения тестов обычно используются три вида геля:

  1. нейтральный, не содержащий специфических антител (применяется для поиска и идентификации антител солевым, и ферментным методами, холодовой стадии пробы на совместимость крови донора и реципиента);
  2. специфический, содержащий антитела (моноклональные или поликлональные) к антигенам эритроцитов крови человека (применяется для типирования антигенов эритроцитов систем АВО, Резус, Келл и т.д.)
  3. антиглобулиновый, содержащий антитела (полиспецифические или моноспецифические) к иммуноглобулинам человека и компонентам системы комплемента (применяется для прямого и непрямого антиглобулинового теста (реакции Кумбса) при поиске и идентификации ауто- и аллоиммунных антител, пробе на совместимость крови донора и реципиента).

Исследуемая кровь добавляется в верхнюю часть микропробирок диагностических карт, и при центрифугировании осуществляется разделение агглютинированных и неагглютинированных эритроцитов следующим образом: неагглютинированные эритроциты имеют размер, сравнимый с размером частиц геля и свободно проходят сквозь них под действием центробежной силы, формируя на дне микропробирки компактный осадок красного цвета - отрицательный результат; агглютинированные эритроциты ввиду больших размеров задерживаются на поверхности геля или в его толще - положительный результат.

Фиксированная агглютинация в геле позволяет легко оценивать результат реакции, а наличие контрольной микропробирки в диагностической карте подтверждает достоверность полученных данных.

В зависимости от силы реакции агглютинации в гелевой среде принята следующая оценка полученных результатов:

  • сильноположительный (++++) - образовавшиеся агглютинаты эритроцитов задержались на поверхности геля;
  • положительный (+++) - агглютинаты располагаются в верхней трети столбика геля;
  • слабоположительный (++) - агглютинаты фиксированы в верхних двух третях геля;
  • очень слабоположительный (+) - агглютинаты располагаются в нижней трети геля;
  • отрицательный (-) - эритроциты формируют на дне микропробирки компактный осадок.

Оборудование и реактивы

  • ID-карты для определения антигенов эритроцитов и антиэритроцитарных антител;
  • ID-центрифуга для центрифугирования карт;
  • термостат на +37°С;
  • штатив для пробирок и карт;
  • пробирки вместимостью 5 и 10 мл;
  • пипетки полуавтоматические одноканальные (10, 25, 50 мкл);
  • перчатки резиновые хирургические;
  • раствор для разведения 1 (раствор бромелина);
  • раствор для разведения 2 (раствор низкой ионной силы - LISS, РНИС);
  • 0,9% раствор хлорида натрия;
  • стандартные типированные эритроциты человека для выявления антител и проведения перекрестной реакции.

Характеристика идентификационных карт

Идентификационные карты (ID-карты) Диа-Мед представляют собой пластиковые карточки, в которые встроено по шесть микропробирок. В пяти пробирках содержится смесь геля и антисывороток. Каждая карточка имеет шестую контрольную пробирку, содержащую нейтральный гель без антител (сtl). Маркировка пробирок в ID-карте осуществляется по выявляемым антигенам, например: А-В-АВ-D-СDЕ-сtl или С-с-Е-е-К-ctl. Идентификационные карты для выявления антител к антигенам эритроцитов имеют некоторые отличия, например, карты "Coombs / Enzyme Test": в трех пробирках, расположенных слева, содержится гель, содержащий антитела к глобулинам человека (моноспецифические анти-IgD или полиспецифические - к иммуноглобулинам различных классов) - реакция Кумбса. В следующих трех пробирках содержится только нейтральный гель, предназначенный для выявления антител к антигенам эритроцитов в солевой среде.

Общие правила использования идентификационных карт

  1. Идентификационные карты должны храниться в сухом, защищенном от света месте при температуре 18-25°С. Срок годности указан в паспортной части каждой карты и на упаковочных коробках.
  2. Растворы для приготовления суспензии эритроцитов, а также стандартные сыворотки и стандартные ID-эритроциты, использующиеся в отдельных исследованиях, должны храниться в сухом, защищенном от света месте при температуре 2-8°С. Срок годности указан на этикетке каждого флакона и упаковочной коробке.
  3. Во избежание получения ложных результатов исследований, запрещается использование любых реагентов и карт с истекшими сроками годности, а также высохших, содержащих пузырьки газа или при повреждении оболочки.
  4. Заготовка крови осуществляется с применением современных флеботомических методик, а также пригодна артериальная, капиллярная и пуповинная (без отмывания) кровь. Для исследований пригодны как образцы цельной крови (взятые в чистую, сухую пробирку), так и образцы крови, взятые на консервантах и стабилизаторах.

Типирование антигенов эритроцитов

ID-карты ДиаМед предназначены для одновременного определения группы крови по системе АВО и резус-принадлежности эритроцитов доноров и реципиентов (включая их слабые варианты антигенов), а также для типирования других антигенов эритроцитов. ID-карты ДиаМед можно использовать взамен или параллельно с изогемагглютинирующими сыворотками, реагентами анти-D, анти-DСЕ, цоликлонами анти-А, анти-В, анти-D и анти-D Супер.

  • [показать] .

    Начальный этап выполняется по-разному, в зависимости от вида используемых ID-карт, содержащих поликлональные (см. ниже п.1а) или моноклональные (см. п. 16) антитела:

    1а) Приготовить взвесь исследуемых эритроцитов в Растворе для разведения ICID-карты, содержащие поликлональные антитела) для чего:

    • выдержать Раствор для разведения 1 до достижения им комнатной температуры;
    • приготовить 5% суспензию исследуемых эритроцитов в Растворе для разведения 1, поместив в пробирку 0,5 мл Раствора для разведения 1 и 50 мкл исследуемой цельной крови или 25 мкл эритроцитной массы;
    • аккуратно смешать и инкубировать 10 мин при комнатной температуре;
    • использовать не позднее 15 мин после инкубации.

    16) Приготовить взвесь исследуемых эритроцитов в Растворе для разведения 2 (ID-карты, содержащие моноклинальные антитела) для чего:

    • выдержать Раствор для разведения 2 до достижения им комнатной температуры;
    • промаркировать чистые пробирки;
    • приготовить 5% суспензию исследуемых эритроцитов в Растворе для разведения 2, поместив в пробирку 0,5 мл Раствора для разведения 1 и 50 мкл исследуемой цельной крови или 25 мкл эритроцитной массы.
  • Дальнейшие действия [показать] .
    1. Промаркировать ID-карту (N исследуемого образца сыворотки или Ф.И.О. пациента).
    2. Снять защитную фольгу с пробирок ID-карты.
    3. В каждую пробирку ID-карты внести по 10 мкл исследуемых эритроцитов, приготовленных в соответствии с п.1а, или по 50 мкл исследуемых эритроцитов, приготовленных в соответствии с п.16.
    4. Установить ID-карты в ротор ID-центрифуги (с обязательным уравновешиванием другими ID-картами, возможно, неиспользованными).
    5. Центрифугировать ID-карты (время и скорость центрифугирования постоянны и заданы автоматически).
    6. Оценить результат исследования: Результат в контрольной микропробирке - "ctl" - должен быть всегда отрицательным. Положительная реакция в "контроле" может быть вызвана присутствием аутоантител и неспецифическими плазменными белками. Если "контроль" положителен - определение недостоверно, его необходимо повторить после однократного отмывания образца эритроцитов 0,9% раствором хлорида натрия или Раствором для разведения 2.
    7. Результаты определения каждого антигена внести в соответствующую графу ID-карты (на белом поле внизу под каждым антигеном).
    8. Идентифицировать результат по следующей схеме (табл. 18.7-18.9)
    Таблица 18.7. Результаты исследования антигенов группы крови АВО и резус-принадлежности в ID-карте АВО/Rh
    Выявляемые антигены Заключение
    А В АВ D СDЕ
    + + + + + АВ Rh+
    + + + - - АВ Rh-
    + - + + + А Rh+
    + - + - - А Rh-
    - + + + + В Rh+
    - + + - - В Rh-
    - - - + + 0 Rh+
    - - - - - 0 Rh-
    Примечание: Специфичность исследования подтверждается по отрицательному результату в пробирке с контролем ID-карты.
    Таблица 18.8 Определение антигенов эритроцитов системы АВО
    Группа крови
    анти-А анти-В анти-АВ
    0(1) - - -
    А1(II) ++++ - ++++
    А2(II) ++++ - ++++
    А3(II) ++/+++ - ++/++++
    А x (II)* -/++ - +/++
    В(II) - ++++ ++++
    В3(III) - +/+++ +/+++
    В x (III)* - -/++ -/++
    А1В(IV) ++++ ++++ ++++
    А2В(IV) +++/++++ ++++ ++++
    Примечание : * - определение очень слабых вариантов антигенов А и В требует дальнейших исследований.
    Таблица 18.9 Определение резус-принадлежности (D, СDЕ)
    Резус-принадлежность Результаты исследования с сыворотками
    Анти-D Анти-СDЕ
    D-положительная ++++ ++++
    D-отрицательная - -
    D-отрицательная, С Е- положительная* -
    Слабоположительная (D u) от ± до +++ от +++ до ++++
    Примечание : * - Положительная реакция с сывороткой анти-СDЕ при отрицательной реакции с сывороткой анти-D свидетельствует о наличии антигенов С, Е и требует дальнейшего типирования с использованием ID-карт: С-с-Е-е-К-сtl или С-С w -с-Е-е-К

Используемые ID-карты

При определении групп крови и резус-принадлежности применяют поликлональные (табл. 18.10 [показать] ) и моноклональные (табл. 18.11 [показать] ) реагенты. Наиболее частое применение на практике вследствие экономической целесообразности находят моноклональные сыворотки.

По современной классификации лица с ослабленным вариантом антигена D, способные вырабатывать анти-D-антитела, подразделяются на семь категорий. Наибольшую частоту встречаемости и практическое значение имеет категория VI, эритроциты которой несут только эпитоп Z антигена D. Лица категории VI (резус-отрицательные реципиенты, но резус-положительные доноры!) могут вырабатывать антитела к неизмененному D и частичному D всех остальных категорий. Для подтверждения группы крови используют различные ID-карты: D(IV -) - для реципиентов, D(IV +) - для доноров.

Определение группы крови АВО и резус-принадлежности проводят путем идентификации специфических антигенов и антител (двойная или перекрестная реакция) (табл. 18.12 [показать] ).

Для углубленного обследования используют другие карты (табл. 18.13-18.14 [показать] ).

Таблица 18.14. ID-карты для типирования других антигенов эритроцитов
ID-карты Конфигурация
Anti-D(human) 6xD
DiaClon anti-Dvi pos 6xD(vi+)
DiaClon anti-Dvi neg 6xD(vi-)
Anti-C w 6xC w
ID-anti-D for D weak confirmation Vial (флакон)
Anti-K(KELl) 6xK(KELl)
DiaClon anti-K(KELl) 6xK(KELl)
Anti-k(KEL2) 6xk(KEL2)
Anti-M 6xM
Anti-N 6xN
Anti-P 1 6xP 1
Anti-Le a 6xLe a
Anti-Le b 6xLe b
Anti-Jk a 6xJk a
Anti-Jk b 6xJk b
Anti-Kp a 6xKp a
Anti-Kp b 6xKp b
Anti-Lu a 6xLu a
Anti-Lu b 6xLu b

Выявление антиэритроцитарных антител

Принцип метода

Исследуемые сыворотки и стандартные эритроциты для выявления антител добавляются в верхнюю часть микропробирок. После инкубации и центрифугирования агглютинированные эритроциты остаются в верхней части пробирки, так как не проходят через гель из-за большого размера агглютинатов (положительный результат). При отсутствии антител к антигенам тест-эритроцитов агглютинаты не образуются. Неагглютинированные эритроциты легко проходят через гель и оседают на дне пробирки (отрицательный результат). Характер агглютинации при выявлении антител к эритроцитам зависит от титра антител, их активность и оценивается от ++++ до +.

  • Алгоритм проведения исследований [показать] .

    Типированные эритроциты перед исследованием необходимо предварительно дважды отмыть от консерванта 0,9% раствором хлорида натрия, а затем выполнить следующие действия:

    • выдержать Раствор для разведения 2 до достижения комнатной температуры;
    • промаркировать пробирки;
    • приготовить 0,8% взвесь типированных эритроцитов в Растворе для разведения 2, поместив в пробирку 1,0 мл Раствора для разведения 2 и 10 мкл крови;
    • снять защитную фольгу с ID-карты;
    • промаркировать ID-карту (номер исследуемого образца сыворотки или Ф.И.О. пациента);
    • добавить по 50 мкл стандартных эритроцитов в микропробирки;
    • добавить по 25 мкл сыворотки или плазмы исследуемого образца в каждую микропробирку;
    • инкубировать 15 мин при температуре +37"С;
    • центрифугировать ID-карты в ID-центрифуге (время и скорость центрифугирования постоянны и заданы автоматически).

    Примечание: стандартные эритроциты панели ID-DiaCell I-II-III и ID-DiaCell I-Ii-III P фирмы DiaMed готовы к применению без предварительного отмывания и обработки Раствором для разведения 2.

  • Интерпретация результатов [показать] .

    Положительная реакция означает наличие в исследуемом образце иммунных антител.

    Если имеет место положительная реакция со всеми эритроцитами панели ID-DiaCell, рекомендуется выполнять аутоконтроль для исключения аутоантител в исследуемом образце.

    Если с одним или более видом эритроцитов панели ID-DiaCell реакция остается отрицательной, специфичность антител может быть установлена с помощью сопроводительного листа - таблицы антигенных профилей, прилагаемой ко всем упаковкам ID-DiaCell. При этом необходимо убедится в том, что номера панели ID-DiaCell1 и сопроводительного листа совпадают.

    Если данная панель не позволяет установить специфичность антител, рекомендуется продолжить идентификацию, используя расширенную панель эритроцитов ID-DiaРanel и/или ID-DiaРanel Р (в зависимости от первоначально использованной методики).

Скрининг и идентификация антител

Скрининг антител выполняется как в нейтральном геле, так и в геле, содержащем антиглобулиновый реагент (табл. 18.15-18.16 [показать] ). В первом случае для исследования используются обработанные ферментом эритроциты, во втором - суспензия эритроцитов в растворе низкой ионной силы. Скрининг и идентификация антител производятся с помощью стандартной панели эритроцитов. При оценке эффективности гелевого теста для скрининга и идентификации антител была установлена его более высокая чувствительность по сравнению с традиционными методиками.

Методы исследования антител к антигенам эритроцитов

  • Антиглобулиновый тест (непрямая реакция Кумбса) [показать] .

    Непрямой антиглобулиновый тест (НАТ) используется для выявления антиэритроцитарных антител. Обычно НАТ выполняется в два этапа:

    1. инкубация эритроцитов и сыворотки (фиксация антител) с последующим отмыванием для удаления несвязавшихся глобулинов; постановка непрямого антиглобулинового теста в гелевом тесте не требует отмывания эритроцитов!
    2. инкубация отмытых эритроцитов с античеловеческим глобулином (АЧГ). Агглютинация свидетельствует о наличии в сыворотке антител, связавшихся с антигенами эритроцитов in vitro.

    НАТ используется для:

    1. определения в сыворотке реципиента антител к эритроцитам донора - при постановке пробы на совместимость;
    2. при скрининге "неожиданных" антиэритро-цитарных антител;
    3. при исследовании антиэритроцитарных антител у беременных;
    4. при исследовании антител в сыворотке больных аутоиммунной гемолитической анемией.

    Ход определения:

    • внести в три расположенные слева пробирки ID-карты по 50 мкл взвеси типированных эритроцитов;
    • добавить в пробирки по 25 мкл исследуемой сыворотки;
    • центрифугировать ID-карты в течение 10 мин;
    • оценить результат исследования. Вписать полученный результат в ID-карту.

    Результаты определения:

    • положительный результат свидетельствует о наличии иммунных (алло) антител в исследуемой сыворотке или плазме (для выяснения специфичности антител используется таблица, прилагаемая к стандартным эритроцитам);
    • отрицательный результат свидетельствует об отсутствии иммунных антител в исследуемой сыворотке или плазме.
  • Ферментный метод [показать] .

    Обработка протеолитическими ферментами повышает агглютинабельность эритроцитов.

    Ход определения:

    • внести в расположенные справа три пробирки ID-карты по 50 мкл взвеси стандартных типированных эритроцитов;
    • добавить в пробирки по 25 мкл Раствора для разведения 1;
    • добавить в пробирки по 25 мкл исследуемой сыворотки.

    Примечание: Раствор для разведения 1 не добавляется, если для исследования используются стандартные типированные эритроциты, предварительно обработанные протеолитическим ферментом (например, ID-DiaCell I-II-III P фирмы DiaMed).

    • инкубировать в течение 15 мин при температуре +37°С;
    • центрифугировать ID-карты в Ш-цент-рифуге в течение 10 мин (параметры установлены автоматически);
    • вписать полученный результат в ID-карту.

    Результаты исследования:

    • положительный результат свидетельствует о наличии аллоантител в исследуемой сыворотке или плазме (для выяснения специфичности антител используется таблица, прилагаемая к стандартным эритроцитам);
    • отрицательный результат свидетельствует об отсутствии аллоантител в исследуемой сыворотке или плазме.
  • Метод холодовой агглютинации [показать] .

    Ход определения:

    • выдержать Раствор для разведения 2, типированные эритроциты и ID-карты в течение 30 мин при температуре 2-8°С;
    • обработать типированные эритроциты Раствором для разведения 2, для чего:
      • промаркировать пробирку;
      • приготовить 0,8% взвесь типированных эритроцитов в Растворе для разведения 2, поместив в пробирку 1,0 мл Раствора для разведения 2 и 10 мкл крови.

    Примечание: стандартные эритроциты ID-DiaCell (фирмы DiaMed) готовы к использованию и не требуют разведения;

    • внести в три расположенные справа пробирки ID-карты по 50 мкл взвеси типированных эритроцитов, обработанных Раствором для разведения 2;
    • добавить в эти пробирки по 25 мкл исследуемой сыворотки;
    • инкубировать в течение 30 мин при температуре 2-8 С;
    • центрифугировать ID-карты в ID-центрифуге в течение 10 мин (параметры установлены автоматически);
    • оценить результат исследования;
    • вписать полученный результат в ID-карту. Результаты исследования:
    • положительный результат свидетельствует о наличии холодовых антител в исследуемой сыворотке или плазме (для выяснения специфичности антител используется таблица, прилагаемая к стандартным эритроцитам);
    • отрицательный результат свидетельствует об отсутствии холодовых антител в исследуемой сыворотке или плазме.

    При наличии в исследуемой сыворотке холодовых или тепловых аутоантител могут наблюдаться ложноположительные результаты. Для исключения их необходимо поставить аутоконтроль:

    • приготовить 0,8% взвесь эритроцитов исследуемой крови в Растворе для разведения 2, добавив к 1,0 мл Раствора для разведения 2 10 мкл цельной крови;
    • внести по 50 мкл приготовленной взвеси эритроцитов в пробирку ID-карты, расположенную слева (для реакции Кумбса), или в пробирку ID-карты, расположенную справа (для ферментного метода и холодовой агглютинации);
    • в пробирки ID-карты внести по 25 мкл исследуемой сыворотки (для ферментного метода необходимо внести в пробирки еще по 25 мкл Раствора для разведения 1);
    • карты инкубировать 15 мин при температуре +37°С (для реакции Кумбса и ферментного метода) или при температуре 2-8°С (для постановки аутоконтроля холодовой агглютинации).

    Положительный результат в аутоконтроле свидетельствует о присутствии в исследуемой сыворотке аутоантител.

Определение совместимости крови донора и реципиента

Целью пробы на индивидуальную совместимость является предотвращение трансфузий гемокомпонентов, несовместимых по антигенам эритроцитов. Тестирование сыворотки реципиента с эритроцитами предполагаемого донора - наиболее надежный способ выявления антител, способных вызвать повреждение перелитых эритроцитов, посттрансфузионные реакции и осложнения гемолитического типа. Проведение такой пробы позволяет:

  1. подтвердить АВО-совместимость донора и реципиента;
  2. выявить антитела в сыворотке реципиента, направленные против антигенов эритроцитов донора.

Тестирование на индивидуальную совместимость крови донора и реципиента по антигенам эритроцитов(табл.18.17 [показать] ) не заменяет обязательное имуногематологическое исследование (типирование антигенов эритроцитов систем АВО, Резус, Келл, выявление антиэритроцитарных антител, поиск и идентификацию аллоантиэритроцитарных антител), а лишь дополняет его.

Таблица 18.17. ID-карты, используемые для проведении пробы на совместимость
ID-карты Конфигурация
Complete Crossmatch A-B-D enz 2xAHG
DiaClon Complete Cross-match A-B-D(VI +)enz 2xAHG
LISS Coombs 6 AHG tests
Coombs anti-Ig G 6 AHG anti-lg G tests
NaCI Enz test and cold aggl 6 enz tests (or 6 NaCI tests)
ABD-Confirmation ABD ABD
DiaClon ABD-Confirmation A-B-D(VI -)A-B-D(VI -)

Ввиду того, что сенсибилизация может появиться даже после трансфузий индивидуально подобранных гемокомпонентов, для проведения проб на совместимость необходимо использовать каждый раз свежую сыворотку пациента, полученную после последней трансфузии гемокомпонентов.

Проба на совместимость должна быть проведена для каждого образца крови донора!

  • Ход определения [показать]
    • выдержать Раствор для разведения 2 до достижения комнатной температуры (20-24°С);
    • промаркировать ID-карты и пробирки (Ф.И.О. донора и реципиента);
    • приготовить 0,8% суспензию эритроцитов донора и реципиента в Растворе для разведения 2 для чего в две маркированные пробирки внести по 1 мл Раствора для разведения 2, добавить по 10 мкл крови донора и реципиента, соответственно;
    • смешать;
    • снять защитную фольгу с соответствующей ID-карты;
    • добавить по 50 мкл приготовленной суспензии эритроцитов донора в микропробирки ID-карты 1, 2, 3, 4, 5;
    • добавить по 50 мкл приготовленной суспензии эритроцитов реципиента в микропробирки ID-карты 4, 5, 6;
    • добавить по 25 мкл сыворотки или плазмы реципиента в микропробирки ID-карты 1, 2, 3, 6;
    • добавить 25 мкл Раствора для разведения 1 в микропробирку ID-карты 4 (ферментный тест);
    • инкубировать 15 мин при температуре +37°С;
    • центрифугировать (время и скорость центрифугирования постоянны и заданы автоматически);
    • оценить результат исследования. Совместимость по антигенам А, В, D (1, 2, 3 микропробирки):
    • четкий положительный или отрицательный результат указывает на соответствие антигенов А, В, О эритроцитов крови донора и реципиента;
    • если наблюдается двойная популяция эритроцитов (в одной микропробирке положительный и отрицательный результат) антигены А, В, D донора и реципиента не идентичны!
    • определение совместимости по антигенам А, В, D действительно только при отрицательной реакции в 6-ой микропробирке (аутоконтроль).
  • Результаты пробы на совместимость (4, 5 микропробирки) [показать]
    • положительный результат в микропробирках ID-карт 4, 5 при отрицательном контроле (микропробирка 6) свидетельствует о несовместимости крови донора и реципиента по антигенам эритроцитов;
    • отрицательный результат в микропробирках ID-карт 4, 5, 6 свидетельствует о совместимости крови донора и реципиента по антигенам эритроцитов;
    • положительная реакция в микропробирке ID-карты 6 (аутоконтроль) требует дальнейшего определения ауто- и аллоантител в сыворотке (плазме) реципиента.
  • Ограничения [показать]
    • определенные лекарственные средства могут вызывать ложноположительную реакцию Кумбса;
    • при некоторых патологических состояниях у больных может наблюдаться положительная реакция Кумбса;
    • бактериальное или другое загрязнение используемого материала может вызывать ложноположительный или ложноотрицательный результат;
    • остатки фибрина в исследуемых образцах могут связывать неагглютинированные клетки и после центрифугирования образовывать тонкую розовую линию на поверхности геля, тогда как большинство клеток будет локализовано на дне микропробирки;
    • суспензии эритроцитов, имеющие чрезмерную концентрацию, могут вызывать ложноположительные реакции.
  • Условия хранения и эксплуатации [показать]

    ID-карты ДиаМед должны храниться при комнатной температуре (+18-25°С) в сухом помещении в течение всего срока годности.

    Срок годности карт - 18 месяцев. Срок годности реагентов - 2 года.

    Результаты исследования на карте сохраняются в неизменном виде:

    • 48 ч при комнатной температуре;
    • три недели в холодильнике (при +2-8°С) при заклеенной липкой лентой верхней части ID-карты.

    Нижнее поле ID-карты можно отклеить или отрезать и использовать как документ в истории болезни или в картотеке.

    Не допускается использование ID-карт с признаками высыхания геля, пузырьками в его толще или повреждением защитной фольги.

    Перед использованием образцы и реагенты должны быть выдержаны до комнатной температуры.

Заключение

Гелевый тест является простым, воспроизводимым, быстрым и очень чувствительным методом, позволяющим сразу выявлять слабые варианты антигенов эритроцитов. Тест оценивается только макроскопически. После короткого обучения персонала, необходимого для правильного выполнения теста, сводятся к минимуму затраты рабочего времени и ошибки, встречающиеся при использовании традиционных методик.

Гелевый тест позволяет стандартизировать лабораторные методики, дать объективную оценку результатов реакции гемагглютинации. Стабильность результатов теста позволяет перепроверять полученные данные, что необходимо для контроля. Результаты теста могут быть фотокопированы для сохранения их в архиве или для учебных целей в сложнодиагностируемых случаях. Для теста используется небольшое количество сыворотки или эритроцитов, что чрезвычайно важно для педиатрических клиник.

Использование гелевой системы позволяет снизить риск заражения персонала даже при работе с потенциально инфицированными образцами. Гелевый тест может быть использован для проведения проб на совместимость по антигенам эритроцитов перед переливанием крови. Для этого используются непрямой антиглобулиновый тест и одностадийный ферментный метод.

Гелевый тест выполняется и оценивается по выше приведенным правилам. Отсутствие этапов отмывания эритроцитов при выполнении непрямого атиглобулинового теста позволяет более эффективно использовать рабочее время, а также благодаря стабильности результатов теста контролировать все полученные результаты.

  • Практическая трансфузиология / Ред. Козинец Г. И., Бирюкова Л. С., Горбунова Н.А. и др.- Москва: Триада-Т, 1996.- 435 с.
  • Руководство по военной трансфузиоло-гии / Ред. Э. А. Нечаев. - Москва, 1991. - 280 с.
  • Руководство по трансфузионной медицине / Под ред. Е. П. Сведенцова. - Киров, 1999.- 716с.
  • Румянцев А. Г., Аграненко В. А. Клиническая трансфузиология.- М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1997.- 575 с.
  • Шевченко Ю.Л., Жибурт Е.Б., Безопасное переливание крови: Руководство для врачей.- СПб.: Питер, 2000.- 320 с.
  • Шевченко Ю.Л., Жибурт Е.Б., Серебряная Н.Б. Иммунологическая и инфекционная безопасность гемокомпонентной терапии.- СПб.: Наука, 1998.- 232 с.
  • Шиффман Ф.Дж. Патофизиология крови / Пер. с англ.- М.- СПб.: Издательство БИНОМ - Невский диалект, 2000.- 448 с.
  • Blood transfusion in Clinical Medicine / Ed. P.L.Mollison, C. P. Engelfriet, M. Contreras.- Oxford, 1988.- 1233 p.
  • Источник : Медицинская лабораторная диагностика, программы и алгоритмы. Под ред. проф. Карпищенко А.И., СПб, Интермедика, 2001

    Антигены эритроцитов.

    На поверхностной мембране и строме эритроцитов содержится более 100 антигенов 19 отдельных систем.

    В эритроцитах человека различают III основных разновидности антигенов:

    гетерофильные антигены – встречаются у многих видов животных и бактерий;

    неспецифические или видовые антигены – не встречаются у других видов животных, но содержатся в эритроцитах всех людей;

    специфические или групповые антигены – изоАГ – содержатся в эритроцитах одних индивидуумов и отсутствуют у других.

    Из всех систем эритроцитарных антигенов наибольшее значение имеют системы АВО и Rh.

    Система АВО . В 1901 г. Ландштайнер обнаружил в эритроцитах человека два антигена: А и В. по содержанию их люди делятся на 4 группы:

    О (I) – нет антигенов А и В;

    А (II) – есть антиген А;

    В (III) – есть антиген В;

    АВ (IV) – есть оба антигена А и В.

    Антигены А и В содержатся только в лейкоцитах, трмбоцитах, различных тканях, слюне, сперме, слезах, моче, но отсутствуют в хрусталике глаза, плаценте, коже и спиномозговой жидкости.

    В сыворотки крови постоянно содержатся антитела к тем антигенам, которые отсутствуют в эритроцитах данного индивидуума. Эти антитела вызывают агглютинацию эритроцитов, содержащих гомологичный антиген. На основе этих закономерностей было создано учение о совместимости групп крови и разработаны схемы, обеспечивающие возможность безопасного переливания крови с лечебной целью.

    Определение группы крови используется для определения отцовства, материнства, а так же в судебно-медицинской практике и криминалистике – для установления пятен крови и пятен другого происхождения.

    Система Rh-антигенов . Rh-антиген открыт Ландштанером в 1940 году. Они установили, что сыворотка кроликов, иммунизированных эритроцитами обезьян макаки-резус, агглютинирует эритроциты человека. Из этого вытекало, что эритроциты обезьян и человека содержат общий антиген, названный Rh-антигеном. Он есть в эритроцитах 85 % популяции европейских народов.

    Имеется 6 разновидностей этого антигена: C, D, E, c, d, e. Главная роль принадлежит антигену D. Он имеется у населения всего мира, за исключением некоторых народностей Дальнего Востока, где встречается только у 4 %. С этим антигеном связаны иммунологические конфликты между организмом резус-отрицательной матери и резус-положительного плода, приводящим к гемолитической болезни новорожденных. Для нейтрализации резус-антигенов плода женщинам перед родами вводят антирезусную сыворотку, блокирующую Rh-антигены и отменяющую индукцию образования противорезусных антител в организме роженицы.

    Лейкоцитарные антигены . Видовая антигенная специфичность лейкоцитов установлена Безредко А.М. в 1900 году. В настоящее время известно около 30 лейкоцитарных антигенов, которые содержаться и в других тканях: тромбоцитах, гранулоцитах, фибробластах, эпителии кожи, сперме. В связи с тем, что эти антигены вызывают реакции трансплантационного иммунитета из называют трансплантационными антигенами или антигенами гистосовместимости.

    В химическом отношении трансплантационные антигены являются липопротеинами, гликопротеинами или белками. У человека они относятся к системе HLA, у мышей к Н2.

    Молекулы HLA-генов состоят из 2-х легких и 2-х тяжелых цепей, т.е. имеют структурное сходство с иммуноглобулинами. Поэтому они могут выполнять функции рецепторов Т-лимфоцитов. Все HLA–гены контролируются отдельным локусом генов, расположенным на коротком плече VI пары хромосом. Система HLA является самостоятельной и не зависит от эритроцитарных систем. Антигены различают по локусам A, B, C, D, DR.

    Подбор доноров проводят по единым медицинским критериям, что обеспечивает безвредность, высокую активность и эффективность крови и её компонентов.

    Каждый донор перед сдачей крови проходит обследование: у него собирают анамнез, проводят тщательный медицинский осмотр и специальное обследование для выявления противопоказаний к сдаче крови и исключения возможности передачи с кровью возбудителей инфекционных заболеваний. Проводят серологическое, вирусологическое и бактериологическое обследования донорской крови.

    Успехи клинической трансфузиологии снижают опасность передачи с кровью и её компонентами возбудителей инфекционных заболеваний (ВИЧ-инфекции, гепатитов В и С, сифилиса, цитомегаловирусной инфекции и др.).

    Основные антигенные системы крови

    Установлено, что антигенная структура крови человека сложна, все форменные элементы крови и белки плазмы разных людей отличаются по антигенам. Уже известно около 500 антигенов крови, образующих более 40 различных антигенных систем.

    Под антигенной системой понимают совокупность антигенов крови, наследуемых (контролируемых) аллельными генами.

    Все антигены крови делят на клеточные и плазменные. Основное значение в трансфузиологии имеют клеточные антигены.

    Клеточные антигены

    Клеточные антигены - сложные углеводно-белковые комплексы (гликопептиды), структурные компоненты мембраны клеток крови. От других компонентов клеточной мембраны они отличаются иммуногенностью и серологической активностью.

    Иммуногенность - способность антигенов индуцировать синтез антител, если они попадают в организм, у которого эти антигены отсутствуют.

    Серологическая активность - способность антигенов соединяться с одноимёнными антителами.

    Молекула клеточных антигенов состоит из двух компонентов:

    Шлеппер (белковая часть антигена, расположенная во внутренних слоях мембраны), определяющий иммуногенность;

    Гаптен (полисахаридная часть антигена, расположенная в поверхностных слоях клеточной мембраны), определяющий серологическую активность.

    На поверхности гаптена расположены антигенные детерминанты (эпитопы) - молекулы углеводов, к которым присоединяются антитела. Известные антигены крови отличаются друг от друга эпитопами.

    Например, гаптены антигенов системы АВ0 имеют следующий набор углеводов: эпитоп антигена 0 - фукоза, антигена А - N-ацетилгалактозамин, антигена В - галактоза. С ними и соединяются групповые антитела.

    Различают три вида клеточных антигенов:

    Эритроцитарные;

    Лейкоцитарные;

    Тромбоцитарные.

    Эритроцитарные антигены

    Известно более 250 антигенов эритроцитов, образующих свыше 20 антигенных систем. Клиническое значение имеет 11 систем: АВ0, Резус (Rh-Hr), MNSs, Келл (Kell), Лютеран (Lutheran), Кидд (Kidd), Диего (Diego), Даффи (Duffy), Домброк (Dombrock), ферментные группы эритроцитов.

    У человека в эритроцитах присутствуют одновременно антигены нескольких антигенных систем.

    Основными в трансфузиологии признаны антигенные системы АВ0 и Резус. Другие антигенные системы эритроцитов в настоящее время существенного значения в клинической трансфузиологии не имеют.

    Антигенная система АВ0

    Система АВ0 - основная серологическая система, определяющая совместимость или несовместимость переливаемой крови. Её составляют два генетически детерминированных агглютиногена (антигены А и В) и два агглютинина (антитела α и β).

    Агглютиногены А и В содержатся в строме эритроцитов, а агглютинины α и β - в сыворотке крови. Агглютинин α - антитело по отношению к агглютиногену А, а агглютинин β - по отношению к агглютиногену В. В эритроцитах и сыворотке крови одного человека не может быть одноимённых агглютиногенов и агглютининов. При встрече одноимённых антигенов и антител возникает реакция изогемагглютинации. Именно эта реакция - причина несовместимости крови при гемотрансфузии.

    В зависимости от сочетания в эритроцитах антигенов А и В (и соответственно в сыворотке антител α и β) всех людей разделяют на четыре группы.

    Антигенная система Резус

    Резус-фактор (Rh-фактор), названный так вследствие того, что впервые был обнаружен у макак резус, присутствует у 85% людей, а у 15% отсутствует.

    В настоящее время известно, что система Резус достаточна сложна и представлена пятью антигенами. Роль резус-фактора при гемотрансфузии, а также при беременности крайне велика. Ошибки, приводящие к развитию резус-конфликта, вызывают тяжёлые осложнения, а иногда и смерть больного.

    Второстепенные антигенные системы

    Второстепенные эритроцитарные групповые системы представлены большим количеством антигенов. Знание этого множества систем имеет значение для решения некоторых вопросов в антропологии, судебно-медицинских исследований, а также для предотвращения развития посттрансфузионных осложнений и некоторых заболеваний у новорождённых.

    Система MNSs включает факторы М, N, S, s. Доказано наличие двух тесно сцепленных между собой генных локусов MN и Ss. В дальнейшем были выявлены другие многообразные варианты антигенов системы MNSs. По химической структуре MNSs - гликопротеиды.

    Система Р. Система антигена Р имеет определённое клиническое значение. Отмечены случаи ранних и поздних выкидышей, причиной которых стали изоантителаанти-Р. Описано несколько случаев посттрансфузионных осложнений, связанных с несовместимостью донора и реципиента по системе антигенов Р.

    Система Келл представлена тремя парами антигенов. Наибольшей иммуногенной активностью обладают антигены Келл (К) и Челлано (к). Антигены системы Келл могут вызывать сенсибилизацию организма во время беременности и при переливании крови, становиться причиной гемотрансфузионных осложнений и развития гемолитической болезни новорождённых.

    Система Лютеран. Один из доноров по фамилии Лютеран имел в эритроцитах крови какой-то ранее неизвестный антиген, приведший к иммунизации реципиента. Антиген был обозначен буквами Lu а. Через несколько лет был открыт второй антиген этой системы Lu b. Их частота: Lu а - 0,1%, Lu b - 99,9%. Антитела анти-Lu b изоиммунные, что подтверждено и сообщениями о значении этих антител в происхождении гемолитической болезни новорождённых. Клиническое значение антигенов системы Лютеран невелико.

    Система Кидд. Антигены и антитела системы Кидд имеют определённое практическое значение. Они могут быть причиной развития гемолитической болезни новорождённых и посттрансфузионных осложнений при многократном переливании крови, не совместимой по антигенам этой системы. Частота антигенов составляет около 75%.

    Система Диего. В 1953 г. в Венесуэле в семье Диего родился ребёнок с признаками гемолитической болезни. При выяснении причины этого заболевания у ребёнка был обнаружен ранее неизвестный антиген, обозначенный фактором Диего (Di). В 1955 г. проведённые исследования выявили, что антиген Диего - расовый признак, характерный для народов монголоидной расы.

    Система Даффи состоит из двух основных антигенов - Fy а и Fy b. Антитела анти-Fy а - неполные антитела, они проявляют своё действие только в непрямом антиглобулиновом тесте Кумбса. Позднее были обнаружены антигены Fy x, Fy 3 , Fy 4 , Fy 5 . Частота зависит от расовой принадлежности человека, что имеет большое значение для антропологов. В негроидных популяциях частота фактора Fy a - 25%, среди китайского населения, эскимосов и аборигенов Австралии - почти 100%, у людей европеоидной расы - 60-82%.

    Система Домброк. В 1973 г. были выявлены антигены Do а и Do b. Фактор Do а встречают в 55-60% случаев, а фактор Do b - в 85-90%. Такая частота выдвигает эту серологическую систему крови на пятое место по информативности в аспекте судебно-медицинского определения отцовства (система Резус, MNSs, AB0 и Даффи).

    Ферментные группы эритроцитов. Начиная с 1963 г. стало известно значительное количество генетически полиморфных ферментных систем эритроцитов крови человека. Эти открытия сыграли значительную роль в развитии общей серологии групп крови человека, а также в аспекте судебно-медицинской экспертизы спорного отцовства. К ферментным системам эритроцитов относят фосфатглюкомутазу, аденозиндезаминазу, глутамат-пируват-трансаминазу, эстеразу-Д и др.

    Рассказать друзьям